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免費代測人(Human)脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)ELISA 檢測試劑盒說明書

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人(Human)脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)ELISA 檢測試劑盒說明書
本試劑僅供研究使用  標本:血清或血漿

試驗原理:
Lp-PLA2試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA).已知Lp-PLA2濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將Lp-PLA2和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌後,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然後加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中Lp-PLA2的濃度呈比例關係。

試劑盒內容及其配製
試劑盒成份(2-8℃保存) 96孔配置 48孔配置 配製
96/48人份酶標板 1塊板(96T) 半塊板(48T) 即用型
塑料膜板蓋 1塊 半塊 即用型
標準品:800ug/L 1瓶(0.6ml) 1瓶(0.3ml) 按說明書進行稀稀
空白對照 1瓶(1.0ml) 1瓶(0.5ml) 即用型
標準品稀釋緩衝液 1瓶(5ml) 1瓶(2.5ml) 即用型
生物素標記的抗Lp-PLA2抗體 1瓶(6ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
親和鏈酶素-HRP 1瓶(10ml) 1瓶(5.0ml) 即用型
洗滌緩衝液 1瓶(20ml) 1瓶(10ml) 按說明書進行稀釋
底物A 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
底物B 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
終止液 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
標本稀釋液 1瓶(12ml) 1瓶(6.0ml) 即用型

人(Human)脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)ELISA 檢測試劑盒說明書
自備材料
1. 蒸餾水。
2. 加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3. 振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性
1. 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水衝洗。
2. 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3. 不要用嘴吸取試劑盒裏的任何成份。

操作注意事項
1. 試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢複到室溫。稀稀過後的標準品應丟棄,不可保存。
2. 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
3. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
4. 使用一次性的吸頭以免交叉汙染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
5. 使用幹淨的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒裏的各種成份及樣品。
6. 洗滌酶標板時應充分拍幹,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
7. 底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露於光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成後應立即讀取OD值。
8. 加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
9. 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法
1、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液後,1000×g離心10分鍾將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用於檢測。1000×g離心30分鍾去除顆粒。
3、 細胞上清液---1000×g離心10分鍾去除顆粒和聚合物。
4、 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鍾,取上清液
5、 保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反複冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍。

人(Human)脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)ELISA 檢測試劑盒說明書
試劑的準備
1. 標準品:標準品的係列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行:
800 ug/L (6號標準品) 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
400 ug/L (5號標準品) 100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
200 ug/L (4號標準品) 100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
100 ug/L (3號標準品) 100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
50 ug/L (2號標準品) 100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
25 ug/L (1號標準品) 100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0 ug/L (空白對照) 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

2. 洗滌緩衝液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。


操作步驟
1. 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。
2. 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做複孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用複孔的盡量做複孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋後加入50ul於反應孔內。
3. 加入稀釋好後的標準品50ul於反應孔、加入待測樣品50ul於反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
4. 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍幹。重複此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
5. 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鍾。
6. 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍幹。重複此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鍾。避免光照。
8. 取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液後應立即測定結果。
9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。

建議使用的實驗方案
 標準品濃度(ug/L) 
A 800 800 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
B 400 400 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
C 200 200 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
D 100 100 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
E 50 50 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
F 25 25 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
G 0 0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
H 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品


局限
6號標準品以上的結果為非線性的,根據此標準曲線無法得到的結果。

試劑盒性能
1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小於1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關係數R值為0.990。
2. 特異性:不與其它細胞因子反應。
3. 重複性:板內、板間變異係數均小於10%。

結 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值:於波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的Lp-PLA2標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的Lp-PLA2含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

3、檢測值範圍:0-800ug/L

4、敏感度: 1.0 ug/L
兔子S100蛋白(S-100)ELISA試劑盒 rabbit Soluble protein-100,S-100 ELISA試劑盒
兔主要組織相容性複合體Ⅱ類(MHCⅡ/RLAⅡ)ELISA試劑盒 Rabbit major histocompatibility complexⅡ,MHCⅡ/RLAⅡ ELISA試劑盒
兔子凝血酶受體(TR)ELISA試劑盒 Rabbit thrombin receptor,TR ELISA試劑盒
兔子可溶性P選擇素(sP-selectin)ELISA試劑盒 rabbit soluble P-selectin,sP-selectin ELISA試劑盒
兔子Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)ELISA試劑盒 rabbit Carboxyterminal propeptide of type Ⅰ procollagen,PⅠCP ELISA試劑盒
兔子Ⅰ型膠原(Col Ⅰ)ELISA試劑盒 rabbit Collagen Type Ⅰ,Col Ⅰ ELISA試劑盒
兔子Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)ELISA試劑盒 rabbit Collagen Type Ⅱ,Col Ⅱ ELISA試劑盒
兔子Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)ELISA試劑盒 rabbit N-terminal procollagen Ⅲ propeptide,PⅢNP ELISA試劑盒
兔子Ⅲ型前膠原氨基端肽(PⅢNT)ELISA試劑盒 rabbit procollagen Ⅲ N-terminal peptide,PⅢNT ELISA試劑盒
 

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